無菌室浮游菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

1、目的
建立無菌室浮游菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范無菌室浮游菌的檢測(cè)。
2、范圍
適用于無菌室（包括潔凈工作臺(tái)）浮游菌的測(cè)試和環(huán)境驗(yàn)證。
3、職責(zé)
QA、QC人員遵照?qǐng)?zhí)行。
4、內(nèi)容
4.1參考標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 16293-2010
4.2測(cè)試方法
本測(cè)試方法為計(jì)數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(zhǎng)條件讓其繁殖到可見的菌落計(jì)數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。
4.3測(cè)試儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基
浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（選用與儀器相適應(yīng)的培養(yǎng)皿）、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.4測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試時(shí)間
4.4.1靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測(cè)試，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。
4.4.2在靜態(tài)a測(cè)試時(shí)，單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10分鐘后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘后開始。在靜態(tài)b測(cè)試時(shí)，單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過20分鐘自凈后開始。
4.5采樣點(diǎn)的確定
4.5.1zui少采樣點(diǎn)數(shù)目見表1，每次zui小采樣量見表2。
表1 zui少采樣點(diǎn)數(shù)目：

表2 zui小采樣量：

4.5.2采樣點(diǎn)位置布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區(qū)域過于稀疏，采樣點(diǎn)按照《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》附件×××車間潔凈度監(jiān)測(cè)采樣點(diǎn)布局圖的要求布置，每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。
4.5.3工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右，可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。
4.6測(cè)試準(zhǔn)備
4.6.1采樣器在進(jìn)入被測(cè)區(qū)域前先清潔表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測(cè)區(qū)域內(nèi)，與被測(cè)試區(qū)域一起消毒（用于*無菌室的采樣器必須預(yù)先放在被測(cè)房間內(nèi)）。
4.6.2A/B級(jí)區(qū)采用一次性培養(yǎng)皿，其它區(qū)域按無菌操作要求，在中檢室潔凈工作臺(tái)上提前制備培養(yǎng)備用（將滅菌后的培養(yǎng)基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養(yǎng)皿每個(gè)傾注約20ml培養(yǎng)基，Φ150mm培每個(gè)傾注約30ml培養(yǎng)基），培養(yǎng)皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養(yǎng)皿在無菌室內(nèi)存放不超過48小時(shí)，2~8℃保存的培養(yǎng)皿一般不超過1周，一次性培養(yǎng)皿在標(biāo)注的有效期內(nèi)使用，過期不得使用。
4.6.3A/B級(jí)區(qū)使用的培養(yǎng)皿在區(qū)域消毒前一次性傳入，隨環(huán)境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內(nèi)使用。若需臨時(shí)傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過C級(jí)與B級(jí)傳遞窗傳入B級(jí)區(qū)進(jìn)行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區(qū)域用培養(yǎng)皿按物品傳入要求當(dāng)天傳入使用。
4.6.4采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面（FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。
4.6.5測(cè)試具體操作見浮游菌采樣器標(biāo)準(zhǔn)操作程序或浮游空氣塵菌采樣器標(biāo)準(zhǔn)操作程序。
4.6.6采樣結(jié)束后，蓋上培養(yǎng)皿蓋子，在培養(yǎng)皿上標(biāo)注所有信息（包括產(chǎn)品批號(hào)，放置位置等），將培養(yǎng)皿用適宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不少于2天。
4.6.7培養(yǎng)結(jié)束后逐個(gè)檢查培養(yǎng)皿，用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
4.7測(cè)試記錄應(yīng)包含以下內(nèi)容
4.7.1被測(cè)試區(qū)域名稱、測(cè)試日期、測(cè)試依據(jù)、測(cè)試者姓名、測(cè)試儀器及測(cè)試方法的描述，測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測(cè)試人員數(shù)，采樣點(diǎn)數(shù)目，測(cè)試次數(shù)、采樣流量，測(cè)試結(jié)果（包括所有統(tǒng)計(jì)計(jì)算資料）等。
4.7.2若為動(dòng)態(tài)測(cè)試，還應(yīng)記錄現(xiàn)場(chǎng)操作人員數(shù)量，現(xiàn)場(chǎng)設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)情況等。
4.8結(jié)果計(jì)算
4.8.1用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
4.8.2每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度計(jì)算按下式進(jìn)行。
4.9結(jié)果評(píng)定
4.9.1每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。
4.9.2在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均菌濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為符合。
4.9.3若有超過規(guī)定者，必須及時(shí)與生產(chǎn)部門，對(duì)該區(qū)域進(jìn)行消毒或其它處理，然后重新測(cè)試至合格。
4.10日常監(jiān)控
4.10.1浮游菌日常監(jiān)控設(shè)糾偏限度和警戒限度（限度范圍及取樣頻次見《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》），以保證無菌室（區(qū)）的微生物濃度受到控制，定期檢測(cè)以檢查微生物負(fù)荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。
4.10.2對(duì)于浮游菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應(yīng)考慮修改，在評(píng)估以下情況后，也應(yīng)確定其他項(xiàng)目的檢測(cè)頻次。
（1）連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；
（2）停工時(shí)間比預(yù)計(jì)延長(zhǎng)；
（3）關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；
（4）在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修；
（5）日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；
（6）消毒規(guī)程的改變；
（7）引起生物污染的事故等；
（8）當(dāng)生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時(shí)；
（9）當(dāng)無菌室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)時(shí)。
4.11注意事項(xiàng)
4.11.1JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5分鐘，檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。
4.11.2單向流無菌室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，非單向流無菌室（區(qū)），采樣口向上。
4.11.3測(cè)試時(shí)必須穿著與被測(cè)區(qū)域潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)并經(jīng)高壓滅菌后的無菌服。
4.11.4布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。
4.11.5采樣結(jié)束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤（FKC型浮游空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護(hù)蓋）。
4.11.6應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。
4.11.7每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作為對(duì)照培養(yǎng)；培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長(zhǎng)。
4.11.8采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
4.11.9由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
4.11.10必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。